产品展厅
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BSA酶联免疫检测试剂盒
【双夹心酶联免疫定量法】
产品货号： EKT0008
（实验前请仔细阅读产品说明书）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!本试剂盒不含任何具有生物危害成分，但是试剂盒使用涉及的检测样本请在具有相应生物安全防护等级实验室进行，由此可能造成的所有生物安全危害由使用者自行负责。
此定量检测牛血清白蛋白 (BSA) 酶联免疫试剂盒，采用抗BSA的单克隆配对抗体，分别作为包被抗体和检测抗体，组成双抗体夹心ELISA检测试剂盒，并与美国标准局的BSA标准品为参照标准，本试剂盒 可检测到1ng/mL的BSA。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系我们。
试剂盒组成：
| 组分名称 | 规格 | 保存条件 | 数量 |
| ELISA酶标板(包被抗BSA蛋白抗体) | 96T | -20℃ | 1 |
| BSA标准品(32 ng/mL、16 ng/mL、8 ng/mL、4 ng/mL、2 ng/mL、1 ng/mL、0 ng/mL ) | 0.4ml/瓶 | -20℃ | 各1瓶 |
| BSA内部参比（20 ng/mL） | 0.4ml/瓶 | -20℃ | 1 |
| TMB底物显色液 | A和B各6.5 mL | -20℃ | 1 |
| 显色底物终止液（2N，H2SO4） | 13ml | 4℃ | 1 |
| 样品稀释液 | 13ml | 4℃ | 1 |
| 洗涤液（10倍浓缩） | 30ml | 4℃ | 1 |
| 酶标记抗体稀释液 | 13ml | 4℃ | 1 |
| 酶标记抗BSA抗体 | 0.13 mL | -20℃ | 1 |
| 产品说明书 | | | 1 |
特别说明：
1.打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整。
2.一周内使用可存于4℃，需长时间保存或多次使用请按保存条件存放。
试验所需自备物品:
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4.吸水纸
洗涤方法:
1.自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。
2.手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。
操作步骤:
1.将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。
2.取出包被有抗BSA的96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔，50 μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比，各两孔，50 μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做1:100稀释，加入各反应孔，100 μL/孔（酶标记抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在15 min内完成。
3.置室温20–24℃避光反应1 h，用洗涤液洗涤四遍，拍干。
4.用移液器加TMB底物显色液100 μL/孔（使用前A、B液等体积混合并恢复至室温），室温20–24℃避光反应10 min，请勿震荡。
5.用移液器加终止液100 μL/孔，稍微震荡5s混匀。
6.在酶标仪450 nm波长处读数。
注意事项：
1.如样品中BSA含量高于32 ng/mL，可将样品做适当稀释。
2.样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。
3.反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。
4.洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。
5.开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置4℃密闭保存。
6.在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免被有BSA的环境和物品污染。
结果判断:
1.实验有效参数：
实验结果须满足以下有效参数为成立：
0 ng/ml OD值≤0.1； 32 ng/ml OD值≥0.80； 阳性参考18–22 ng/ml； R2≥0.98；
2.计算：
在EXCEL里面以标准浓度为横坐标，消零OD值为纵坐标作散点图，添加趋势线，再显示曲线方程和R2值，将检测样品OD值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。
| 标准浓度 | OD1 | OD2 | OD3 | 平均值 | 消零OD |
| 0 | 0.069 | 0.062 | 0.064 | 0.065 | 0 |
| 1 | 0.111 | 0.109 | 0.113 | 0.111 | 0.046 |
| 2 | 0.13 | 0.127 | 0.131 | 0.129 | 0.064 |
| 4 | 0.191 | 0.192 | 0.193 | 0.192 | 0.127 |
| 8 | 0.332 | 0.319 | 0.327 | 0.326 | 0.261 |
| 16 | 0.583 | 0.588 | 0.596 | 0.589 | 0.524 |
| 32 | 1.039 | 1.025 | 1.054 | 1.039 | 0.974 |
3.判定：
在标准曲线中，设OD 0–16 ng/mL为区间A；OD 16–32 ng/mL为区间B；大于OD 32 ng/mL为区间C。
1).如测得的OD值小于标准曲线中2 ng/mL对应OD值，则BSA含量测定结果计为小于2 ng/mL。
2).如不同稀释浓度的样本测得的OD值均位于区间A，则最终结果计算取其 稀释度的测定值。
3.如不同稀释度的测定值均位于区间B或同时位于区间A和B或同时位于区间B和C，则取其最接近OD 16 ng/mL的测定值。
4).如不同稀释度测定值均位于区间C，则需将样本做进一步稀释测定，使其测定值居2 – 32 ng/mL所对应的OD值区间，计算方法按上述7.3.2 – 4。
5).如高稀释度测得OD高于低稀释度或未稀释的样本OD，则可能是操作失误或样本中BSA含量过高（HOOK效应），需重试或调整稀释度。
6).最终结果要考虑稀释因素（实际BSA含量＝计算值×稀释倍数）。
本试剂盒技术指标
1.检测限和定量限检测限：零浓度标准品加上两倍的标准差（20个零孔计算值），本试剂盒检测限计算为0.2 ng/mL ( ppb )。定量限为标准曲线检测下限,1 ng/mL。
2.准确度和精密度
计算批内批间变异系数，在高中低三个浓度（20、10、5）下五个重复检测计算批内变异系数，不同时间重复三次计算批间变异系数，CV%均小于10%。
| 批间 | 批内 | ||||||
| 浓度(ng/ml) | SD | 回收率% | CV% | 浓度(ng/ml) | SD | 回收率% | CV% |
| 20 | 0.06 | 107.3 | 5.6 | 20 | 0.047 | 102.6 | 4.6 |
| 10 | 0.049 | 105.4 | 4.7 | 10 | 0.022 | 101.2 | 2.2 |
| 5 | 0.059 | 99.66 | 5.9 | 5 | 0.028 | 97.6 | 2.9 |
3.交叉反应
本试剂盒对人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，鱼明胶没有交叉反应，而对山羊血清有10%的交叉反应（以相同OD值时BSA和山羊血清的浓度的比值的百分数为准）。
| 和BSA没有交叉反应的物质 | |
| 反应物质 | 反应浓度 |
| 人血白蛋白 | 10 mg/mL |
| 小鼠血清 | 10% |
| 兔血清 | 10% |
| 鱼明胶 | 1% |
4.钩状效应
当样品浓度远高于标准曲线 浓度的时候，会产生HOOK效应，即反应OD值小于32 ng/mL的BSA时候的浓度，本试剂盒为500 μg/mL以上。
仅供科研实验使用
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