JM109(DE3) 感受态细胞

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1.产品简介：

JM109(DE3)菌株来源于JM109，用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于JM109的染色体上，所以称为JM109(DE3)。

基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)

特点：可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。JM109(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高于10⁸ cfu /μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率 ，避免反复化冻。

2．整个动作要轻柔。

3．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用