抗体的生物素（Biotin）标记

生物素分子量小（244 Da），含活性羧基（-COOH），可通过化学键与目标分子的氨基、巯基等基团共价偶联。免疫检测?ELISA/Western Blot?：生物素化抗体 + SA-HRP，增强检测灵敏度。流式细胞术?：生物素-荧光素（如SA-FITC）复合物分析细胞表面抗原。核酸分析?原位杂交?：生物素标记DNA/RNA探针定位基因表达。病原体诊断?：如HPV检测试剂盒中的生物素化探针。蛋白质互作研究?BioID技术?：融合BirA酶的目的蛋白标记邻近蛋白，通过链霉亲和素磁钓富集后质谱鉴定等。

一般每个抗体可以标记3-5个生物素，标记时，生物素与抗体的比率受抗体浓度影响，对于10 mg/ml 的抗体溶液来说，生物素应超过抗体12倍（摩尔数），对于2 mg/ml 的抗体溶液应超过20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入抗体溶液中。待标记的蛋白样品不得含有叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物。

生物素标记抗体

1)、抗体的前处理：

a. 选择适当截留的超滤柱中加入400μl 标记反应溶液（0.1M PBS pH 7.2），加入1mg抗体，混匀。

b. 4℃，6,000rpm，离心2min,弃滤液；于超滤柱中再加入200μl 标记反应溶液，混匀。4℃，6,000rpm，离心2min,

c. 重复步骤b  6到7次。

d. 混匀超滤柱中的残留的液体，室温静置1min；将超滤柱反转倒置于一新的超滤管中，4℃，1000×g，2min，收集液体。

e. 取50μl PBS于超滤柱中混匀，静置1min。倒置超滤柱，4℃，6,000rpm，2min。收集液体。

f. 步骤d与步骤e的收集的滤液合并，用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml， 4℃放置备用。

2)、生物素的标记：

a. 将生物素溶解在其合适的溶剂中（请参照所选生物素的说明书，不同的生物素其溶剂不同），浓度为20mg/ml,按照生物素与抗体分子摩尔比1:20的比例加入抗体溶液，室温反应1h。

b. 葡聚糖凝胶分离纯化/透析袋或者超滤管去除游离生物素及其他试剂。

c. 将抗体保存于合适的抗体保存液