辣根过氧化物酶 (Horseradish Peroxidase, HRP)?临床检验中的常用酶，广泛用于：免疫检测（如ELISA试剂盒显色反应）。蛋白质印迹（Western Blot）和免疫组织化学。

HRP酶标二抗?
与辣根过氧化物酶偶联的二级抗体，用于识别一级抗体并催化底物显色，是免疫检测的关键试剂。抗体标记HRP最为经典的方法为NaIO₄氧化法，将HRP糖基氧化成醛基，醛基与抗体的-NH₂反应生成希夫氏碱，抗体分子与HRP分子形成稳定结构。标记的时候一般按照抗体分子与HRP分子摩尔比1:4的比例进行标记，此时,两者的质量约为1:1。

抗体的HRP标记（NaIO₄氧化法）

标记以2mg抗体为例

1).抗体的处理

待标记抗体在50mM碳酸盐缓冲液 (0.015M Na₂CO₃,0.035M NaHCO₃ ,pH9.6) 中透析，其间换液2次，抗体浓度调整为2mg/ml；或者将高浓度的抗体用0.5M碳酸盐缓冲液(0.15M Na₂CO₃,0.35M NaHCO₃ ,pH9.6)稀释到2mg/ml，如果原抗体溶液中含有Tris、NH₄⁺等游离氨基的试剂，必须透析除去。

2).HRP酶的氧化

a. 称取2mg HRP干粉(Frdbio)溶于100 μL ddH₂O 中；

b. 称取 NaIO₄ 21mg，溶于1 mL的ddH₂O中，吸取100μL NaIO₄溶液与100μL的HRP溶液缓慢混合，4℃下静置 30min，此时溶液为绿色；

注意：此后的操作均在避光条件下进行。

c. 吸取２μL乙二醇缓慢加入氧化后的HRP溶液，室温避光静置30min，此时溶液为褐色。

3).抗体的标记

a. 将氧化好的HRP溶液直接加入到已处理好的抗体溶液中，室温反应２小时；

b. 称取0.4mg的NaBH₄，溶解于20μL的 ddH₂O 中，全部加入上步反应液中，4℃静置 2h（不再透析），每30min摇动 一 次；

c. PBS(pH7.2)透析过夜，标记液中加入体积比30%～50%的甘油，混匀后置于-20℃保存。

HRP快速标记试剂盒