1.产品简介：

Dextrin Beads 用于纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质。Dextrin Beads可以一步纯化MBP融合蛋白，并通过10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。

2.纯化流程

2.1 缓冲液的准备

所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm滤膜过滤。

结合/ 洗杂液: 20mM Tris-HCl，200mM NaCl， 1mM EDTA,pH7.4

洗脱液: 20 mM Tris-HCl，1mM EDTA，10mM Maltose，pH7.4

注意: 结合液和洗脱液中可加入1mM DTT或10mM β–巯基乙醇

2.2 样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.3 Dextrin Beads装填

层析柱的装填（使用储液器装填）

1) 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

2) 将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3) 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。

4) 打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的*流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过*装柱流速的75%）当柱床高度稳定后，在*的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5) 关闭泵，关闭层析柱出口。

6) 如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。

7) 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。

8) 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

2.4 样品纯化

1) 将Dextrin Beads装入合适的层析柱，层析用5 倍柱体积的结合液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2) 将样品加到平衡好的Dextrin Beads中（保证目的蛋白与Dextrin Beads充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3) 用10-15倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4) 使用5-10倍柱体积的洗脱液，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5) 依次使用3倍柱体积的结合液和5倍柱体积的去离子水平衡填料，*再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

2.5 SDS-PAGE检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

3. 填料清洗

Dextrin Beads纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

3倍柱体积的去离子水；

3倍柱体积的0.1% SDS或0.5M NaOH溶液；

3倍柱体积去离子水，20%乙醇4-30度保存。

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